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有關黃曲黴毒素檢測
2018-09-10 14:09

黃曲黴毒素係藥典檢查項下規定內容,是強烈的致癌物質,因此在食品和藥品中需要對其嚴格把控。其中以黃曲黴毒素B1最多,B2、G1、G2較少。

目前有關的檢測方法主要是根據黃曲黴毒素中毒性最大的成分黃曲黴毒素B1B2G1G2能溶於氯仿、甲醇而不溶於己烷、乙醚和石油醚的性質,在紫外燈光下(365nm)觀察,分別呈藍色和黃綠色熒光。或通過薄層色譜,用黃曲黴毒素標準品做對照,根據斑點大小定量。報道的檢測方法有薄層色譜法、酶聯吸附免疫法、免疫親和柱-熒光法、免疫親和柱-HPLC法。


黃曲黴毒素檢測品種

黃曲黴毒素(通則2351)

品種(19)

本品每1000g含黃曲黴毒素B1不得過5μg,含黃曲黴毒素G2、黃曲黴毒素G1、黃曲黴毒素B2和黃曲黴毒素B1的總量不得過10μg

陳皮、胖大海、桃仁、柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、薏苡仁、酸棗仁、大棗、遠誌、僵蠶、地龍、蜈蚣、全蠍、水蛭


附【通則2351】 黃曲黴毒素測定法

第一法

本法係用高效液相色譜法(通則0512)測定藥材、飲片及製劑中的黃曲黴毒素(黃曲黴毒素B1 、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1和黃曲黴毒素G2 總量計),除另有規定外,按下列方法測定。

表1

項目

操作

色譜條件與係統適用性試驗

以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑;以甲醇-乙腈-水(40:18:42)為流動相;采用柱後衍生法檢測,①碘衍生法:衍生溶液為0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解,用水稀釋至1000ml製成),衍生化泵流速每分鍾0.3ml,衍生化溫度70℃; ②光化學衍生法:光化學衍生器(254nm);以熒光檢測器檢測,激發波長λex = 360nm (或365nm),發射波長λex = 450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應大於1.5。

混合對照品溶液的製備

精密量取黃曲黴毒素混合對照品溶液(黃曲黴毒素B1 、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1和黃曲黴毒素G2 標示濃度分別為1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,即得。

供試品溶液的製備

取供試品粉末約15g(過二號篩),精密稱定,置於均質瓶中,加入氯化鈉3g,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速攪拌2分鍾(攪拌速度大於11000轉/分鍾),離心5分鍾(離心速度2500轉/分鍾),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,量取續濾液20.0ml,通過免疫親合柱,流速每分鍾3ml,用水20ml洗脫,洗脫液棄去,使空氣進入柱子,將水擠出柱子,再用適量甲醇洗脫,收集洗脫液,置2ml量瓶中,並用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。

測定法

分別精密吸取上述混合對照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,注入液相色譜儀,測定峰麵積,以峰麵積為縱坐標,進樣量為橫坐標,繪製標準曲線。另精密吸取上述供試品溶液20~25μl,注入液相色譜儀,測定峰麵積, 從標準曲線上讀出供試品中相當於黃曲黴毒素B1 、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1和黃曲黴毒素G2 的量,計算,即得。

第二法

本法係用高效液相色譜-串聯質譜法測定藥材、飲片及製劑中的黃曲黴毒素(以黃曲黴毒素B1 、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1和黃曲黴毒素G2 總量計),除另有規定外,按下列方法測定。

項目

操作

色譜、質譜條件與係統適用性試驗

 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑;以10mmol/L醋酸銨溶液為流動相A,以甲醇為流動相B;柱溫25℃;流速每分鍾0.3ml;按下表3中的規定進行梯度洗脫。

以三重四極杆串聯質譜儀檢測;電噴霧離子源(ESI),采集模式為正離子模式;各化合物監測離子對和碰撞電壓(CE)見下表4。

係列混合對照品溶液的製備

精密量取黃曲黴毒素混合對照品溶液(黃曲黴毒素B1 、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1和黃曲黴毒素G2 的標示濃度分別為1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)適量,用70%甲醇稀釋成含黃曲黴毒素B2、G2濃度為0.04~3ng/ml,含黃曲黴毒素B1、G1濃度為0.12~10ng/ml的係列對照品溶液,即得(必要時可根據樣品實際情況,製備係列基質對照品溶液)。

供試品溶液的製備

同第一法。

測定法

精密吸取上述係列對照品溶液各5μl,注入高效液相色譜-質譜儀,測定峰麵積,以峰麵積為縱坐標,進樣濃度為橫坐標,繪製標準曲線。另精密吸取上述供試品溶液5μl,注入高效液相色譜-串聯質譜儀,測定峰麵積,從標準曲線上讀出供試品中相當於黃曲黴毒素B1、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1和黃曲黴毒素G2的濃度,計算,即得。 


表3

時間(分鍾)

流動相A(%)

流動相B(%)

0~4.5

6515

3585

4.5~6

150

85100

6~6.5

065

10035

6.5~10

65

35


黃曲黴毒素B1B2G1G2對照品的監測離子對、碰撞電壓(CE)參考值

表4

編號

中文名

英文名

母離子

子離子

CE(V)

1

黃曲黴毒素G2

Aflatoxin G2

331.1

331.1

313.1

245.1

33

40

2

黃曲黴毒素G1

Aflatoxin G1

329.1

329.1

243.1

311.1

35

30

3

黃曲黴毒素B2

Aflatoxin B2

315.1

315.1

259.1

287.1

35

40

4

黃曲黴毒素B1

Aflatoxin B1

313.1

313.1

241.0

285.1

50

40


【附注】 

(1)本實驗應有相應的安全、防護措施,並不得汙染環境。 

(2)殘留有黃曲黴毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿,應置於專用貯存容器(裝有10%次氯酸鈉溶液)內,浸泡24小時以上,再用清水將玻璃器皿衝洗幹淨。 

(3)當測定結果超出限度時,采用第二法進行確認。


 

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