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色譜柱的使用與注意事項
2018-12-13 14:12

色譜柱的安裝:
○1安裝:為了保證色譜柱使用時有最高柱效,連接管路盡量使用適合的細徑管路,色譜柱進出口的連接必須非常適配,連接管端口部分必須平整,不能有毛刺和切口斜麵等現象,各種連接管路請使用專業工具切割修整;
○2取出色譜柱,仔細查看柱身洗脫液流向箭頭標識,用手旋下柱兩端的塑料堵頭放回包裝盒中備用。放好色譜柱,使洗脫液流向和柱身所示流向一致。
○3色譜柱的正確連接:用手將“連接管路的PEEK(推薦)或者其它材質的接頭”旋入色譜柱兩端,管路接頭要和色譜柱接口連接緊密,確保零死體積連接,在色譜儀正常運行時沒有漏液。
色譜柱的使用:
色譜柱是昂貴的色譜耗材,正確的使用和維護對保證色譜柱的正常使用和延長壽命至關重要。
1、色譜柱使用前注意事項:
○1色譜柱內的存儲液:
色譜柱看的存儲液,如沒有特殊說明均為質檢報告中所述流動相,
氨基(NH2)、氰基(CN)、矽膠柱(SiO2)均為正相條件–正己烷/異丙醇體係,反相柱(C1、C4、C8、C18、苯基Phenyl)均為甲醇/水體係,檢測前,請用相互溶的試劑將其替換;
○2新色譜柱的平衡:
新反相色譜柱:用純甲醇衝洗色譜柱30個柱體積,再更換成能與檢測流動相互溶的流動相衝洗30個柱體積,最後用流動相穩定係統至基線平穩;
新的正相色譜柱:用異丙醇0.5ml/min衝洗30個柱體積,再更換成檢測流動相穩定係統至基線平穩;
○3流動相和樣品保持潔淨:
由於懸浮在樣品或流動相中的細小顆粒會堵塞色譜柱兩端的篩板,各種試劑盡量使用色譜純級的,用量少的試劑純度至少是分析純,水最好是超純水和全玻璃器皿雙蒸水,使用前建議用0.45μm的濾膜過濾;樣品溶液使用針筒過濾;
樣品中的雜質是造成色譜柱汙染、柱效下降的最主要原因之一,複雜樣品可選樣品預處理柱(SPE柱)進行樣品處理,如果不方便處理,最好使用相匹配的保護柱,樣品溶劑與流動相要相匹配,不能出現樣品不互溶,極性相差太大等想象,否則會造成色譜峰形變差,鬼峰等現象,使用流動相溶解樣品能有效的避免上述情況發生;
○4色譜柱允許使用的pH範圍:
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH範圍,請仔細對照你的色譜柱的使用pH範圍,在pH範圍以外使用,會使矽膠基質溶解或鍵合相水解,對色譜柱造成不可恢複的損傷,如果在臨界pH處使用,分析結束後立即用適合於色譜柱保存並與當前使用的流動相互溶的淋洗液置換掉。
表一
色譜柱型號 C8 C18 NH CN
pH耐受範圍 2-10.0 2-10.0 1.5-9 1.5-8.5

色譜柱的保存:
○1短時間保存:使用間隔不超過四天,色譜柱按平時維護程序衝洗至基線平穩,反相色譜柱保存在不帶有緩衝鹽、離子對試劑的有機相/水溶液中,有機相不低於20%;正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中,反相使用保存在純有機溶劑中;並將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
○2長期保存:反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中;正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中,反相使用時需將柱內存儲液用異丙醇置換,最後用正己烷保存;最好將色譜柱從儀器上取下,並將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
五、色譜柱的維護:
1、柱壓升高是每個色譜工作者都很頭疼的問題,長時間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正常現象;短時間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高,排除儀器的故障,確定是色譜柱自身原因,一般有以下幾點:
○1柱頭的過濾篩板汙染(固體顆粒物堵塞、強保留物質累積):
解決方法:
a、在柱前端加上在線過濾器或保護柱,用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向衝洗色譜柱180min;
b、在柱前端加上在線過濾器或保護柱,反向使用;
c、可將柱頭打開,將色譜柱頭中過濾篩板取出,在稀硝酸溶液內超聲清洗20min,純水超聲清洗20min,最後用甲醇超聲清洗20min,重新裝入色譜柱;
○2柱頭填料汙染(固體顆粒物堵塞、強保留物質累積):
解決方法:
a、用可以溶解汙染物的溶劑較長時間(180min)反向衝洗色譜柱;
b、可將柱頭打開,小心取出被汙染的填料,用相同的填料重新裝入修複;
○3pH使用不當造成的損傷:
解決方法:
pH使用不當造成固定相的缺失或塌陷,很難使色譜柱恢複,隻能更換色譜柱。
2、使用保護柱和在線過濾器:
樣品和流動相中不能完全過濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產生的固體顆粒物,進入到色譜柱中就會堵塞篩板,導致柱壓升高,柱效下降,保護柱和在線過濾器上都有篩板,孔徑與分析柱的孔徑相同,能阻止顆粒物到達色譜柱,在分析故障中,柱壓升高占很大比例,因此建議您在色譜柱前端加上在線過濾器或者保護柱;
3、緩衝鹽的正確使用:
緩衝鹽通常易溶於水,難溶於有機溶劑,其使用不當會析出,加快泵柱塞杆和密封圈,流通閥的磨損,堵塞色譜柱頭篩板,填料基質上的微孔和顆粒間的間隙,使填料板結柱壓升高,阻礙基質上鍵合相的碳鏈自由舒展,使色譜柱保留能力下降,柱效降低,縮短其使用壽命,緩衝鹽析出後很難去除,因此正確的使用緩衝鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要,具體方法如下:
☆使用前過渡。使用後衝洗
○1等度條件:分析前後用過渡流動相衝洗柱體積不少於20-30個柱體積,或分析完成後用過渡流動相以0.2ml/min(根據柱規格調整)衝洗過夜;
○2梯度條件:分析前,用與初始流動相組成相同的流動相以分析流速衝洗色譜柱不少於20-30個柱體積,分析後,用該過渡流動相衝洗色譜柱不少於20-30個柱體積,且梯度盡量平緩,避免緩衝鹽析出。
*過渡流動相:有機相和水相的比例和分析流動相中兩相比例一致或者水相比例高於分析流動相,絕對不含緩衝鹽。
○3避免強保留物質在色譜柱保留:強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積,是一個緩慢的過程,一段時間後會對樣品成分產生額外的保留行為,引起峰變寬,拖尾,使柱效下降,保留時間變化,到一定程度時會導致柱壓升高,對許多樣品特別是複雜樣品很難判斷其是否含有強保留物質,因此要預防這一切的方式,堅持每天分析完成後用純甲醇或純乙腈反向衝洗色譜柱20個柱體積以上
清洗方法:
a、未使用緩衝鹽,每天分析完成後用純甲醇或純乙腈反向衝洗色譜柱20個柱體積以上;
b、使用緩衝鹽,用上述方法去除緩衝鹽後,用純甲醇或純乙腈反向衝洗色譜柱20個柱體積以上;



 

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